在凝膠法中,經(jīng)常使用的方法就包括試管法。
那在凝膠法中,試管法的使用方法是怎么樣的呢?
首先需要把供試品和鱟試劑等量加入試管中,輕搖晃使其充分混勻,再將該試管置于水浴中靜置,取出后再觀察該試管的凝膠是否形成。試驗(yàn)時(shí),需要作試驗(yàn)管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管共4種,來作對照試驗(yàn)。
1.試驗(yàn)管
需要取出0.1ml的樣本和0.1ml的鱟試劑。水、注射液等一般樣本在試驗(yàn)前是不需要進(jìn)行處理的,但是如果血液、腹腔滲出液等其他液體就必須在試驗(yàn)前就進(jìn)行處理,因?yàn)檫@些樣本可能存在鱟試驗(yàn)法反應(yīng)的抑制物。所用的鱟試劑需要在試驗(yàn)前就對其以標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素進(jìn)行校準(zhǔn),且是可以進(jìn)行試驗(yàn)的。
2.陽性對照管
分別取出0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.1ml的鱟試劑,在使用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素是應(yīng)以WHO標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)標(biāo)定。在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的內(nèi)毒素濃度需要根據(jù)鱟試劑的靈敏度來確定,一般來說,范圍在1~5 ng/ ml即可。
3.陰性對照管
只需取0.1ml的無熱原水和0.1ml的鱟試劑即可。
4.抑制對照管
需要取0.1ml的供試品和0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.2ml的鱟試劑。
上述四管均放入37℃孵育1~2小時(shí)觀察結(jié)果。如形成凝膠堅(jiān)固,試管倒轉(zhuǎn)180度不變形,則記為(++);如混濁度和粘滯性明顯增加,呈膠體狀,但傾斜試管時(shí)變形,則記為(+);如液體流動(dòng)自如,透明無變化或稍混濁,有少量顆粒細(xì)絮片狀物,則記為(-)。
以上對照的4支試管需要在37℃的環(huán)境中靜置1~2個(gè)小時(shí),再對試管進(jìn)行觀察,以此來得出結(jié)果。如果試管中形成的凝膠是凝固的,且將試管翻轉(zhuǎn)180度都不會(huì)變形時(shí),則該試管被記為(++);但是如果試管出現(xiàn)了混濁的情況而且試管內(nèi)還有粘滯性的情況,整體是呈膠體狀的,將試管傾斜時(shí)液體也會(huì)呈傾斜,則記為(+),如果整個(gè)試管的液體是非常流動(dòng)的,且試管內(nèi)部呈透明色或者只有輕微混濁,且出現(xiàn)了些許顆粒細(xì)絮物,則記為(-)。
如果供試品中出現(xiàn)了抑制物,可以把供試品進(jìn)行處理,比如將其進(jìn)行稀釋,或者用其他方法將抑制物清除,再重新進(jìn)行檢測。如果這些方法都沒有效果的話,還可以采取其他細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法,比如家兔法(Rabbit pyrogen test)。