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探索CD14:免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵LPS受體及其分子結(jié)構(gòu)解析

發(fā)布時(shí)間: 2024-06-11  點(diǎn)擊次數(shù): 276次

CD141981年由Todd首先在人單核細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的膜蛋白分子,Maliszewski1985年又從人血漿中發(fā)現(xiàn)了與單核細(xì)胞表面CD14結(jié)構(gòu)相似的可溶性CD14 solubleCD14,sCD14。因發(fā)現(xiàn)它僅分布在成熟髓樣細(xì)胞表面,早期將CD14視為一種白細(xì)胞分化抗原當(dāng)時(shí)人們并不知道CD14的具體功能,直到1990,Wright等首先報(bào)道CD14是一種LPSlipopolysaccharide,脂多糖)受體,這也是首-次發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面存在LPS受體。

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CD14基因位于第5號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上5q23q31),約含有1338個(gè)核苷酸殘基。從核苷酸的第76位到1200,編碼一段有375個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈,該多肽鏈的前19位信號(hào)肽被水解后,即形成成熟的CD14分子,356個(gè)氨基酸。與CD14基因相鄰的區(qū)域含有幾種髓樣特異性生長(zhǎng)因子和受體基因,包括細(xì)胞因子中的IL-31L-4、IL-5IL-1、巨噬細(xì)胞集落刺激因子M-CSF、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子GM-CSF、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子aFGF、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ECGF),受體基因有M-CSF受體、血小板源性生長(zhǎng)因子受體PDGFRβ2-腎上腺素能受體β2 AR以及分化抗原CD49aCD49b。

CD14基因位于第18號(hào)染色體上,后者也至少編碼五種以上生長(zhǎng)因子和受體基因。因此,根據(jù)CD14基因的定位人們?cè)茰y(cè)CD14可能是某種受體分子。鼠CD14基因編碼區(qū)與人CD14具有74%的同源性。鼠CD14351個(gè)氨基酸殘基組成,與人CD14 氨基酸序列具有66%的同源性。Ikeda等用小鼠CD14基因的PCR擴(kuò)增片段作探針從牛染色體基因文庫(kù)中獲得了牛CD14基因,序列分析發(fā)現(xiàn)在其起始密碼子ATG之后有一個(gè)由90 bp構(gòu)成的內(nèi)含子,比人和鼠CD14中的內(nèi)含子多了兩個(gè)核苷酸88bp

CD14全長(zhǎng)編碼基因1122 bp共編碼373個(gè)氨基酸,其中含有信號(hào)肽序列但缺少穿膜結(jié)構(gòu)域,在其序列中有3個(gè)潛在的N-連接糖基化位點(diǎn)。牛CD14的核苷酸序列與人及小鼠CD14 的同源性分別為78%69%,所推導(dǎo)的氨基酸序列與人CD14 的同源性為73.5%,與鼠CD14的同源性?xún)H為61.4%,三者之間氨基酸序列的同源性為55%。此外其他動(dòng)物CD14 基因也與人CD14基因序列有較高的同源性。

同天然免疫系統(tǒng)的其他模式識(shí)別蛋白,CD14為亮氨酸家族成員其胞外區(qū)含有多個(gè)富亮氨酸重復(fù)序列leucine-rich re-peats)(LXXLXLX。經(jīng)序列分析比較發(fā)現(xiàn)這一特征性序列竟是來(lái)源于在進(jìn)化關(guān)系上較遠(yuǎn)的生物種類(lèi),如酵母、果蠅,提示亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)可能具有重要的生物學(xué)意義?,F(xiàn)認(rèn)為這一結(jié)構(gòu)域通過(guò)形成雙歧β折疊與脂質(zhì)作用,CD14識(shí)別并結(jié)合LPS的關(guān)鍵區(qū)域。

在人和小鼠CD14 分子含有10個(gè)富亮氨酸重復(fù)序列比牛CD14分子多4個(gè)。CD14分子還含有多個(gè)半胱氨酸殘基,可以形成二硫鍵,這對(duì)于穩(wěn)定其空間構(gòu)象及維持其生物活性具有重要意義。缺失突變研究表明CD14N末端152個(gè)氨基酸序列具有完整的結(jié)合LPS 和介導(dǎo)細(xì)胞激活的作用,說(shuō)明CD14結(jié)合LPS和激活細(xì)胞的功能區(qū)域位于前152個(gè)氨基酸以?xún)?nèi)其中氨基酸57643944片斷為LPS的結(jié)合域,因?yàn)閷⑦@些區(qū)域刪除可導(dǎo)致與LPS結(jié)合能力完-全喪失。氨基酸710,91391101可能為CD14的激活域因?yàn)閯h除這些區(qū)域后CD14雖能結(jié)合LPS,但缺乏激活作用。此外,CD14分子含有多個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn),屬糖蛋白。

根據(jù)CD14在體內(nèi)的存在形式,分為存在于細(xì)胞表面的膜結(jié)合型CD14membrane-bound CD14mCD14和血漿內(nèi)的sCD14。mCD14是一種分子量為5.3萬(wàn)~5.5萬(wàn)的糖蛋白主要通過(guò)糖基磷脂酰肌醇glycosylphosphatidylinositol,GPI錨著在細(xì)胞膜上,少數(shù)mCD14也可通過(guò)跨膜肽與細(xì)胞膜結(jié)合,其附膜形式不影響其功能活性。mCD14在細(xì)胞內(nèi)合成后,先在高爾基復(fù)合體內(nèi)糖化,其羧基端再與GPI結(jié)合,通過(guò)GPI的磷脂部分附著在細(xì)胞膜上。

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